AAVPrime™ AAV表達包裝系統不用添加輔助病毒,由包裝質粒中的pHelper質粒提供了生產具有感染性的AAV病毒顆粒所需要的腺病毒基因產物(如:E2A,E4和VA RNA基因),安全的製備高滴度的AAV顆粒。 將HEK293T細胞與三種帶有AAV包裝必需因子的質粒共轉染(右圖)。 並使用膜純化或者兩相分配系統純化得到高純度病毒顆粒供活體實驗研究。
轉基因載體質粒(Transgene plasmid)攜帶您感興趣的基因(GOI)和兩個ITRs, 您可選擇啟動子例如CMV,EF1a,CAG,CBh或組織特異性啟動子以及報告基因例如GFP,以獲得最佳基因表達和進行檢測。 攜帶野生型AAV的Rep和Cap基因的質粒(Rap & Rep in trans)以及攜帶AAV產生所需的腺病毒VA、E4和E2A基因的質粒(Ad helper genes)會與轉基因載體質粒(transgene pladmid)共轉染來包裝AAV病毒顆粒。
現有訂製服務可對human或mouse ORF、shRNA、sgRNA、CRISPR all-in-one (SaCas9 & sgRNA)或任何您有興趣的基因(GOI)進行AAV病毒包裝服務,可包裝長度低於3 kb的目標基因。根據您的實際需求,病毒titer可達 5×1012 GC/mL 或更高。
針對不同細胞、組織類型,現有12種血清型可供選擇,同血清型的差異主要在於衣殼蛋白的不同,外源基因在特定細胞/組織的表達效率和組織親和性往往和所選擇的血清型密切相關。合適的血清型可進一步提高實驗效率。
GeneCopoeia提供以下AAV病毒載體,所有載體均適用於搭配不同血清行進行包裝。載體可包裝的最大片段長度為3kb。
若您不需要客製化AAV病毒包裝服務,可訂購預製的control或常見基因的AAV病毒顆粒:請至GeneCopoeia網站選購
HT1080 cells in 24-well plates were transduced with the indicated amounts of purified AAV particles expressing eGFP. Cells were visualized with a fluorescence microscope (Exposure time: 400 ms).